Главная Обратная связь

Дисциплины:






Лабораторные работы



Биохимия белков и нуклеиновых кислот

Занятие 18

Переваривание и всасывание белков.
Анализ желудочного сока.

Цель занятия: сформировать представления о пищевой ценности белков, молекулярных механизмах их переваривания и всасывания в желудочно-кишечном тракте, путях формирования пула свободных аминокислот тканей и жидкостей организма. Освоить методы определения кислотности и патологических компонентов желудочного сока.

 

Исходный уровень знаний и навыков

 

Студент должен знать:

1 Строение, классификацию и свойства основных классов аминокислот.

2 Уровни структурной организации белковой молекулы.

3 Механизм микросомального окисления.

4 Механизмы мембранного транспорта веществ.

 

Студент должен уметь:

1 Проводить титрационный анализ.

2 Проводить качественные реакции на кровь и молочную кислоту.

 

Структура занятия

Теоретическая часть

1.1 Роль белков в питании. Полноценные и неполноценные белки. Нормы белка в питании. Заменимые и незаменимые аминокислоты. Азотистый баланс.

1.2 Обмен простых белков. Переваривание белков в ЖКТ. Состав и свойства желудочного сока. Значение компонентов сока в переваривании белков (HCl, пепсин, слизь и др.). Характеристика пепсина. Механизмы образования и секреции HCl в желудочном соке. Регуляция секреции HCl (роль гистамина, гастрина, ацетилхолина и др.).

1.3 Кишечный сок. Его состав и свойства. Характеристика панкреатических и кишечных ферментов. Механизм активации трипсина, химотрипсина и др.

1.4 Значение градиента pH соков ЖКТ в переваривании белков. Механизмы переваривания белков и всасывания аминокислот в ЖКТ.

1.5 Медиаторы и гормоны ЖКТ – гистамин, серотонин, секретин, холецистокинин, гастроингибирующий пептид, соматостатин, глюкагон, энкефалины и др.

1.6 Гниение белков в толстом кишечнике. Обезвреживание продуктов гниения в печени.

1.7 Эндогенный пул аминокислот в тканях – пути формирования и утилизации.

 

Практическая часть

2.1 Решение задач.

2.2 Проведение повторного инструктажа по технике безопасности.

2.3 Лабораторные работы.

 

Задачи

1 Какие соединения являются незаменимыми факторами питания:

а) тре; б) гомоцистеин; в) фолиевая кислота; г) цис; д) креатин; е) холин?

2 Какие аминокислоты являются заменимыми в питании человека:

а) лиз; б) фен; в) тир; г) тре; д) про; е) вал?

3 Глутатион не содержит:

а) тре; б) сер; в) глу; г) гли; д) мет; е) цис?

4 Животные белки являются более полноценными по сравнению с растительными, потому что:



а) в животных гликопротеидах содержатся редкие углеводы;

б) в них больше содержится сер и гли;

в) животные белки больше адсорбируют микроэлементов;

г) среднее содержание три и лиз в животных белках выше;

д) отличаются более высокой усвояемостью;

е) животные белки больше адсорбируют витаминов группы B?

5 Какие аминокислоты способны поддерживать у здорового человека азотистый баланс:

а) тре; б) тир; в) фен; г) ала; д) сер; е) глу; ж) лиз; з) цис; и) вал?

6 Какие ферменты являются более важными для переваривания белков:

а) энтерокиназа; б) карбоксипептидаза; в) гистидин аммиак-лиаза; г) пепсин; д) химотрипсин; е) трипсин; ж) эластаза ; з) амилаза; к) карбангидраза?

7 Какие соединения будут инициировать выделение кишечником гастрина:

а) этанол; б) пищевые жиры; в) глюкоза; г) белок; д) секретин; е) NaCl?

8 В чем причина снижения продукции HCl при гиповитаминозе B1:

а) повышенное образование ацетилхолина;

б) пониженное образование и ускоренный гидролиз ацетилхолина;

в) торможение декарбоксилазных реакций;

г) снижение активности ферментов b-окисления;

д) нарушение транспорта O2;

е) усиленная секреция электролитов?

9 Механизм активации протеаз ЖКТ включает:

а) фосфорилирование проферментов;

б) ограниченный протеолиз;

в) гидроксилирование;

г) оптимум pH;

д) формирование оптимальной среды электролитов;

е) активацию кофакторами?

10 Каков азотистый баланс у человека, если с пищей поступило 80 г белка за час, а с мочой за это время выделилось 16 г азота?

 

Лабораторные работы

 

Лабораторная работа № 1. Количественное определение общей кислотности, общей, свободной и связанной соляной кислоты в одной пробе желудочного сока

Принцип метода. Основан на титровании желудочного содержимого раствором 0,1н NaOH в присутствии индикаторов с различными зонами перехода. Кислотность желудочного сока выражают количеством миллимоль едкого натра, нейтрализующего 1 л желудочного сока.

Основные фракции кислот желудочного сока:

“общая кислотность” желудочного сока – это сумма всех кислот желудочного содержимого;

“свободная соляная кислота” – свободная минеральная HCl;

“связанная соляная кислота” – кислореагирующие соли (хлориды) белков и других слабых оснований;

“общая соляная кислота” – сумма свободной и связанной HCl.

Количественное определение свободной соляной кислоты. Свободная соляная кислота оттитровывается раствором 0,1н NaOH в присутствии индикатора диметиламиноазобензола, имеющего зону перехода окраски от красной до оранжевой при pH 3,0. Слабые же кислоты (молочная, уксусная кислота, кислые фосфаты и связанная соляная кислота) при pH 2,9–4,0 находятся в растворе в недиссоциированном состоянии и в реакцию со щелочью не вступают.

Ход работы. К 10 мл желудочного сока добавить 1–2 капли спиртового раствора диметиламиноазобензола и титровать раствором 0,1н NaOH до появления оранжевой окраски.

Произвести расчет на 1000 мл желудочного сока. Так как затраченное на титрование количество едкого натра эквивалентно количеству соляной кислоты в пробе желудочного сока, то количество соляной кислоты в 1 л желудочного сока (в моль/л) составит

 

a ´ 0,1 ´ 1000

X = ¾¾¾¾¾¾¾ (1)

b

 

где а количество 0,1н раствора NaOH, затраченное на титрование, мл;
0,1 количество NaOH в 1 мл 0,1 N раствора, моль;
b количество желудочного сока, взятого для титрования, мл;
объем желудочного сока, мл.

Количественное определение общей кислотности желудочного сока. Титрование общей кислотности желудочного сока проводится раствором 0,1н NaOH в присутствии индикатора фенолфталеина с зоной перехода окраски в пределах pH 8,2–10,0. При pH ниже 8,2 он бесцветный, а при pH выше 10,0 – красный.

Ход работы. К 10 мл профильтрованного желудочного сока добавить 1–2 капли раствора фенолфталеина и титровать 0,1н раствора NaOH до появления слабо-розового окрашивания, не исчезающего в течение 1 мин. Произвести расчет на 1000 мл желудочного сока.

Количественное определение общей кислотности, общей, свободной и связанной соляной кислоты в одной порции желудочного сока.

Ход работы. Отмерить в колбочки по 10 мл желудочного сока и добавить по 1-2 капли диметиламиноазобензола и фенолфталеина. Титровать 0,1н раствором NaOH до появления оранжевого окрашивания (первая отметка количества израсходованного 0,1н раствора NaOH). Затем продолжить титрования до лимонно-желтого цвета (вторая отметка) и, наконец, до розового окрашивания, не исчезающего в течение 1 мин (третья отметка).

В процессе титрования отсчет ведется от начальной точки!

Первая отметка соответствует количеству свободной соляной кислоты, третья – общей кислотности. Вторая отметка используется для расчета количества общей соляной кислоты. Среднее арифметическое между вторым и третьим пунктом соответствует общей соляной кислоте. Количество связанной соляной кислоты вычисляется как разница между общей и свободной соляной кислотой. Например, при титровании 0,1н раствором едкого натра затрачено титрованного раствора (с начала титрования): до первой отметки (оранжевый цвет) – 3,3 мл, до второй (лимонно-желтый цвет) – 4,6, до третьей (розовый цвет) – 5,6 мл. Среднее между второй и третьей отметкой –

(4,6 + 5,6)/2 = 5,1 мл.

Произвести расчет содержания свободной соляной кислоты, общей соляной кислоты, общей кислотности на 1000 мл желудочного сока по формуле (1).

Этот способ расчета неприменим при наличии молочной кислоты в желудке. Поэтому в пробах желудочного сока, содержащего молочную кислоту, ограничиться вычислением свободной соляной кислоты и общей кислотности.

Норма. Показатели кислотности профильтрованного желудочного содержимого взрослого человека после стандартногопробного завтрака составляют:

- общая кислотность – 40–60 ммоль/л (новорожденные – 2,8 ммоль/л; дети до года – 4–20 ммоль/л);

- свободная HCl – 20–40 ммоль/л (новорожденные – 0,5 ммоль/л);

- связанная HCl – 10–20 ммоль/л;

- общая HCl – 30–60 ммоль/л.

Полученные данные вносятся в таблицу:

 

Задача Цвет V 0,1 н NaOH, мл Содержание HCl, ммоль/л Общая кислотность Выводы
свободная связанная общая
Оранжевый            
Желтый  
Розовый  
Оранжевый            
Желтый  
Розовый  
Оранжевый            
Желтый  
Розовый  

 

Клинико-диагностическое значение. При различных заболеваниях желудка кислотность может быть повышенной, пониженной и нулевой. При язвенной болезни желудка или гиперацидном гастрите наблюдается гиперхлоргидрия – увеличение содержания свободной соляной кислоты и общей кислотности. При гипоацидном гастрите или раке желудка отмечается гипохлоргидрия – уменьшение количества свободной соляной кислоты и общей кислотности. При раке желудка, хроническом атрофическом гастрите отмечается полное отсутствие соляной кислоты и значительное снижение общей кислотности – ахлоргидрия. При злокачественном малокровии, раке желудка наблюдается полное отсутствие соляной кислоты и пепсина – ахилия.

Выводы. Записать полученный результат и дать его клинико-диагности­ческую оценку.

_______________________________________________________________

_______________________________________________________________

_______________________________________________________________

_______________________________________________________________

_______________________________________________________________

_______________________________________________________________

_______________________________________________________________

 

Лабораторная работа № 2.Обнаружение патологических компонентов желудочного сока

а) Обнаружение молочной кислоты по реакции Уффельмана

Принцип метода. При взаимодействии фенолята железа, имеющего фиолетовый цвет, с лактатом образуется лактат железа желто-зеленого цвета.

Ход работы. К 20 каплям раствора фенола добавить 1-2 капли раствора хлорного железа. Получается раствор фенолята железа фиолетового цвета. В пробирку с фенолятом железа прилить по каплям желудочный сок (нормальный и сок, содержащий молочную кислоту).

В присутствии молочной кислоты фиолетовая окраска переходит в желто-зеленую вследствие образования лактата железа. При одновременном присутствии соляной кислоты жидкость обесцвечивается. Это объясняется тем, что сильная соляная кислота полностью разрушает комплекс железа с фенолом, а также вытесняет более слабую молочную кислоту из ее соли; вследствие этого реакция на присутствие молочной кислоты отрицательная.

Клинико-диагностическое значение. Органические кислоты (молочная, уксусная, масляная и др.) имеют обычно микробное происхождение и появляются в желудочном содержимом в результате ахлоргидрии и последующего сбраживания компонентов пищи. Наличие органических кислот в желудочном содержимом натощак часто встречается при атрофических гастритах и раке желудка.

Выводы. Записать полученный результат и дать его клинико-диагности­ческую оценку.

_______________________________________________________________

_______________________________________________________________

_______________________________________________________________

_______________________________________________________________

_______________________________________________________________

_______________________________________________________________

_______________________________________________________________

 

б) Бензидиновая проба на кровь.

Принцип метода. Гемоглобин обладает каталазной активностью и разлагает пероксид водорода с образованием молекулярного кислорода, который окисляет бензидин или другой краситель. При этом происходит изменение окраски с бесцветной на темно-синюю.

Ход работы. В пробирку с 1 мл желудочного сока добавляют 4-5 капель 0,2 %-го спиртового раствора бензидина и 5 капель 1 %-го раствора пероксида водорода. При наличии в желудочном соке крови в результате окисления бензидина развивается синее окрашивание.

Полученные данные вносятся в таблицу:

 

Определяемый компонент Используемые реактивы Пробы желудочного сока
в норме при патологии
Общая кислотность Фенолфталеин    
Свободная HCl Диметиламиноазобензол    
Лактат (молочная к-та) Фенолят железа    
Кровь Бензидин    

Примечание – Если результаты какой-либо работы являются отрицательными, то в соответствующей графе ставится прочерк.

Клинико-диагностическое значение. Кровь появляется в желудочном содержимом при изъязвлении стенок желудка при язвенной болезни, эрозивном, язвенном гастрите, ожогах слизистой желудка и раке желудка.

Выводы. Записать полученный результат и дать его клинико-диагности­ческую оценку.

_______________________________________________________________

_______________________________________________________________

_______________________________________________________________

_______________________________________________________________

_______________________________________________________________

_______________________________________________________________

_______________________________________________________________

 

Рекомендуемая литература

Основная

1 Материал лекций.

2 Березов Т. Т., Коровкин Б. Ф. Биологическая химия. М.: Медицина, 1990. С. 319–336; 1998. С. 409–429.

3 Николаев А. Я. Биологическая химия. М.: Высшая школа, 1989. С. 303–308.

Дополнительная

4 Марри Р. и др. Биохимия человека. М.: Мир, 1993. Т. 2. С. 267–298.

5 Филиппович Ю. Б. Основы биохимии. М.: Высшая школа, 1993. С. 255–258.

6 Элементы патологической физиологии и биохимии / Под ред. Ашмарина И. П. М.: Изд-во МГУ, 1992. С. 57–69.

 

 

Занятие 19

Тканевый обмен аминокислот.
Обезвреживание продуктов обмена

Цель занятия: сформировать представления об основных путях метаболизма свободных аминокислот в тканях. Изучить механизмы и значение реакций детоксикации аммиака в норме и при патологии. Освоить методику определения концентрации мочевины в сыворотке крови и моче.

 





sdamzavas.net - 2019 год. Все права принадлежат их авторам! В случае нарушение авторского права, обращайтесь по форме обратной связи...