Главная Обратная связь

Дисциплины:






ПРЕПАРАТ №1 ПРЕПАРАТ №2



Streptococcus pneumoniae в органахClostridium tetani

окраска по Грамуокраска по Граму

ПРЕПАРАТ №3

Clostridium perfringens

в материале от больного

окраска по Граму

 

5. Постановка ИФА для определения цитотоксина C. Difficile.

 

Реагенты

1) Иммуносорбент – планшет полистироловый с адсорбированными на внутренней поверхности лунок антителами к цитотоксину C. difficile.

2) Исследуемый материал (копрофильтрат).

3) Положительный контрольный образец (К+), содержащий цитотоксин, инактивированный.

4) Отрицательный контрольный образец (К–), не содержащий цитотоксин, инактивированный.

5) Поликлональные антитела к цитотоксину C. difficile из сыворотки крови кролика.

6) Конъюгат – антитела против глобулинов кролика, меченые пероксидазой хрена.

7) Субстратный буферный раствор, содержащий пероксид водорода.

8) Раствор хромогена тетраметилбензидина (ТМБ).

9) Стоп-реагент – раствор 2M серной кислоты.

Проведение анализа

1) Внесение исследуемых и контрольных образцов.

В лунки планшета, например, А-1 и А-2, В-1 и В-2, С-1 и С-2 и т.д 1 внести по 100 мкл исследуемого материала.

Внесение контрольных образцов:

100 мкл (К–) в лунки А-11 и A-12;

100 мкл (К+) в лунки В-11 и В-12.

2) Добавление во все лунки по 50 мкл рабочего раствора поликлональных антител к цитотоксину C. difficile. Инкубация 60 мин при 37°С в термостате.

3) По окончании инкубации содержимое лунок тщательно аспирировать в сосуд с дезинфицирующим раствором.

4) Внести во все лунки по 100 мкл рабочего раствора конъюгата. Инкубировать в течение 30 мин при температуре 37°С.

5) По окончании второй инкубации удалить содержимое лунок и промыть планшет 5 раз.

6) Внести во все лунки по 100 мкл рабочего раствора хромогена тетраметилбензидина и инкубировать в темноте в течение 30 мин при температуре 18–25°С.

7) Внести во все лунки по 100 мкл стоп-реагента.

8) Измерить оптическую плотность на многоканальном фотометре при 450 нм с фоновой длиной волны 620–650 нм.

Расчеты и оценка результатов

1) Рассчитать среднее арифметическое значение оптической плотности в лунках с отрицательным контрольным образцом.

2) На основании полученных данных вычислить «точку отсечения» – критическое значение оптической плотности (ОПкрит) по формуле:

 

ОПкрит = ОП(К–) + 0,05.

 

3) Среднее значение оптической плотности в лунках с отрицательным контрольным образцом не должно превышать 0,15 ед. опт. плотн. при использовании двухволнового режима измерения.

4) Среднее значение оптической плотности в лунках с положительным контрольным образцом должно быть не менее 0,8 ед. опт. плотн.



5) Результат анализа считают положительным, если оптическая плотность образца больше ОПкрит.

6) Результат анализа считают отрицательным если оптическая плотность образца меньше ОПкрит.

7) Проводят протоколирование работы и делают заключение.

 

Таблица. Результаты иммуноферментного анализа определения цитотоксина C. difficile.

 

 
A                     K1(+) K2(+)
B                     K1(+) K2(+)
C                        
D                        
  Заключение  

 

ЗАНЯТИЕ №3

Тема: Возбудители острых кишечных инфекций: эшерихии, шигеллы.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ЗАНЯТИЯ:

1. Знать теоретический материал по теме занятия.

2. Освоить лабораторную диагностику колиэнтерита и шигеллезов.

3. Научиться решать ситуационные задачи по теме занятия.

 

ВОПРОСЫ К ЗАНЯТИЮ:

1. Общая характеристика и классификация семейства энтеробактерий.

2. Эшерихии: свойства, резистентность.

3. Энтеропатогенные, энтеротоксигенные, энтероинвазивные и энтерогеморрагические кишечные палочки. Факторы патогенности и патогенез эшерихиозов.

4. Лабораторная диагностика эшерихиозных инфекций.

5. Шигеллы – возбудители дизентерии, классификация, свойства, резистентность.

6. Факторы патогенности шигелл. Патогенез дизентерии, иммунитет.

7. Лабораторная диагностика, лечение и профилактика шигеллезов.

8. Биопрепараты: поливалентная эшерихиозная ОКВ-сыворотка; типовые эшерихиозные ОК-сыворотки: О111К58, О55К59, О26К60; колибактерин, агглютинирующая дизентерийная сыворотка Зоне, Флекснера.

ЛИТЕРАТУРА:

1. Лекционный материал.

2. Учебник «Медицинская микробиология» под редакцией проф. Д.К. Новикова, проф. И.И. Генералова, 2003, стр. 193-202.

3. «Практикум по медицинской микробиологии» С.А.Павлович, 1993, стр. 120-123.

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:

1. Микробиологическая диагностика колиэнтерита

День Материал исследования Ход исследования Результат исследования
1. Фекалии больного в консерванте Посев фекалий на среду Левина  
2.   Учет роста на среде Левина   Постановка ориентировочной реакции агглютинации на стекле с поливалентной ОК-В сывороткой В-группы энтеропатогенных эшерихий. Посев колонии, давшей (+) реакцию с ОКВ сывороткой, на косой агар для выделения чистой культуры  
3.   Учет роста на косом агаре, мазок, окраска по Граму, микроскопия   Постановка ориентировочной реакции агглютинации на стекле с типовыми сыворотками О111К58, О55К59, О20К84 Постановка развернутой реакции агглютинации с сывороткой О26К60 в 2 ряда: 1-й ряд – сыворотку развести до титра О-антител и добавить гретую культуру. 2-ой ряд – сыворотку развести до титра К (В)-антител и добавить живую культуру. Пересев культуры на среды Гисса  
4.   Учет биохимических свойств Л С Г М МН H2S индол
             
Заключение:

 

2. Демонстрация бактериологического метода диагностики дизентерии.

ЗАНЯТИЕ №4

Тема: Патогенные сальмонеллы – возбудители брюшного тифа и паратифов, сальмонеллезов.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ЗАНЯТИЯ:

1. Знать теоретический материал по теме занятия.

2. Уметь определить сальмонеллы по культуральным свойствам на средах Эндо, Левина, Ресселя, висмут-сульфит агаре.

3. Уметь дифференцировать сальмонеллы по биохимическим свойствам.

4. Научиться выделять гемокультуру при брюшном тифе и паратифах.

5. Знать биопрепараты для диагностики брюшного тифа и паратифов.

6. Научиться решать ситуационные задачи по теме занятия.

ВОПРОСЫ К ЗАНЯТИЮ:

1. Сальмонеллы: таксономия, свойства, резистентность.

2. Антигенная структура, серологическая классификация Кауфмана-Уайта.

3. Факторы патогенности сальмонелл. Источник инфекции, пути передачи патогенез брюшного тифа.

4. Ранний метод диагностики брюшного тифа. Профилактика, лечение.

5. Серологический диагноз брюшного тифа и бактерионосительства. Фаготипирование.

7. Возбудители сальмонеллезов. Факторы патогенности, патогенез сальмонеллеза.

8. Лабораторная диагностика сальмонеллезной инфекции. Профилактика и лечение сальмонеллезов.

9. Биопрепараты: агглютинирующие адсорбированные О- и Н- сальмонеллезные сыворотки, неадсорбированные агглютинирующие брюшнотифозные и паратифозные сыворотки, люминесцирующая брюшнотифозная сыворотка, диагностикум брюшнотифозный О, диагностикум брюшнотифозный Н, эритроцитарный брюшнотифозный Vi-диагностикум; брюшнотифозные Vi-бактериофаги.

ЛИТЕРАТУРА:

 

1. Лекционный материал.

2. Учебник «Медицинская микробиология» под редакцией проф. Д.К. Новикова, проф. И.И. Генералова, 2003, стр. 202-210.

3. «Практикум по медицинской микробиологии» С.А.Павлович, 1993, стр. 115-120.

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:

1. Ранний метод диагностики брюшного тифа. Выделение гемокультуры.

 

День Материал Ход исследования Результаты
Кровь больного Посев 5 мл крови в 50 мл желчного бульона. Термостат 37оС на сутки  
  Учет роста на желчном бульоне Пересев с желчного бульона на среду Левина. Термостат 37оС на сутки  
  Учет роста на среде Левина. Пересев бесцветных колоний на среду Ресселя. Термостат 37оС на сутки  
  Учет роста на среде Ресселя Приготовление мазка, окраска по Граму, микроскопия Постановка реакции агглютинации на стекле с адсорбированными Н- сыворотками брюшного тифа и паратифа В. Пересев на среды Гисса. Термостат 37оС на сутки  
  Учет биохимических свойств Г Л С М МН МПБ
          Н2S индол
   
Заключение:

 

 

2. РПГА для серодиагностики брюшнотифозного бактерионосительства (демонстрация).

 

Ингредиенты Разведения сыворотки  
1:10 1:20 1:40 1:80 К  
Физраствор 0,4 0,4 0,4 0,4 0,4  
Сыворотка больного 1:5 0,4 0,4 0,4 0,4 -  
Эритроцитарный Vi-диагностикум брюшного тифа            
Термостат 1 – 1,5 часа  
  Результат          
Заключение:  
                       

 

3. Бактериологическое исследование остатков пищи при пищевой токсикоинфекции (демонстрация).

 

День Материал Ход исследования Результаты
Остатки пищи (колбаса) Посев материала: 1. На среду Левина для обнаружения кишечной палочки и сальмонелл 2. На молочно-солевой агар для выявления стафилококка 3. На скошенный агар в конденсоционную воду для обнаружения протея (по Шукевичу) 4. На среду Китта-Тароцци для обнаружения клостридий ботулизма  
-“- Учет роста на среде Левина Учет роста на молочно-солевом агаре Учет роста протея на скошенном агаре Учет роста на среде Китта-Тароцци Пересев бесцветной колонии на среду Ресселя  
-“- Учет роста на среде Ресселя Приготовление мазка. Окраска по Граму, микроскопия Постановка реакции агглютинации на стекле с адсорбированными сальмонеллезными H-сыворотками Пересев в среды Гисса  
-“- Учет биохимических свойств Л С Г М МН МПБ
            Н2S индол
Заключение:

 

 

ЗАНЯТИЕ № 5





sdamzavas.net - 2018 год. Все права принадлежат их авторам! В случае нарушение авторского права, обращайтесь по форме обратной связи...