Главная Обратная связь

Дисциплины:






Тема: Возбудители холеры, ботулизма. Патогенные хеликобактерии.



ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ЗАНЯТИЯ:

1. Знать теоретический материал по теме занятия.

2. Освоить лабораторную диагностику хеликобактерной инфекции методом ИФА и ПЦР.

3. Знать биопрепараты для диагностики и профилактики холеры.

4. Промикроскопировать демонстрационные препараты и правильно их зарисовать.

5. Научиться решать ситуационные задачи по теме занятия.

ВОПРОСЫ К ЗАНЯТИЮ:

1. Возбудители ботулизма: таксономия, свойства, резистентность.

2. Факторы патогенности, механизм действия ботулотоксинов, патогенез ботулизма.

3. Лабораторная диагностика ботулизма. Профилактика и лечение.

4. Вибрионы – возбудители холеры, свойства, резистентность.

5. Факторы патогенности холерных вибрионов. Механизм действия токсина, генетический контроль токсинообразования. Патогенез холеры.

6. Лабораторная диагностика холеры. Профилактика и лечение.

7. Хеликобактерии: таксономия, свойства, факторы патогенности, роль в развитии язвенной болезни и рака желудка.

8. Лабораторная диагностика хеликобактерной инфекции. Профилактика и лечение.

9. Биопрепараты: ботулинические антитоксические сыворотки, агглютинирующая холерная О1-сыворотка, холерная вакцина, холерные фаги «С» и Эль-Тор.

 

ЛИТЕРАТУРА:

1. Лекционный материал.

2. Учебник «Медицинская микробиология» под редакцией проф. Д.К. Новикова, проф. И.И. Генералова, 2003, стр. 186-188, 237-243, 281-282.

3. «Практикум по медицинской микробиологии» С.А.Павлович, 1993, стр. 127-131, 143-145.

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:

 

1. Лабораторная диагностика хеликобактерной инфекции:

а) ПЦР;

б) Постановка ИФА для серологической диагностики инфекции H. Pylori:

Реагенты

1) Иммуносорбент – планшет полистироловый с адсорбированными на поверхности лунок антигеном CagA Helicobacter pylori.

2) Исследуемые сыворотки.

3) Положительный контрольный образец сыворотки (К+), содержащий антитела к антигену CagA Helicobacter pylori.

4) Отрицательный контрольный образец сыворотки (К–), не содержащий специфических антител.

5) Конъюгат – антитела против IgG человека, меченые пероксидазой хрена.

6) Субстратный буферный раствор, содержащий пероксид водорода.

7) Раствор хромогена тетраметилбензидина (ТМБ).

8) Стоп-реагент – раствор 2M серной кислоты.

 

Проведение анализа

1) Внесение исследуемых и контрольных образцов.

В лунки планшета, например, А-1 и А-2, В-1 и В-2, С-1 и С-2 и т.д 1 внести по 100 мкл разведенных исследуемых сывороток в дублях. Предварительное разведение сывороток – 1/100.

Внесение контрольных образцов:

100 мкл (К–) в лунки А-11 и A-12;

100 мкл (К+) в лунки В-11 и В-12.



2) Инкубация 30 мин при 37°С в термостате.

3) По окончании инкубации содержимое лунок тщательно аспирировать в сосуд с дезинфицирующим раствором. Промыть планшет 5 раз

4) Внести во все лунки по 100 мкл рабочего раствора конъюгата. Инкубировать в течение 30 мин при температуре 37°С.

5) По окончании второй инкубации удалить содержимое лунок и промыть планшет 5 раз.

6) Внести во все лунки по 100 мкл рабочего раствора хромогена тетраметилбензидина и инкубировать в темноте в течение 30 мин при температуре 18–25°С.

7) Внести во все лунки по 100 мкл стоп-реагента.

8) Измерить оптическую плотность на многоканальном фотометре при 450 нм с фоновой длиной волны 620–650 нм.

 





sdamzavas.net - 2017 год. Все права принадлежат их авторам! В случае нарушение авторского права, обращайтесь по форме обратной связи...