Главная Обратная связь

Дисциплины:






Гибридизация нуклеиновых кислот



Гибридизация нуклеиновых кислот,как и ПЦР, позволяет идентифицировать возбудителя в пробе без предварительного выделения. Для проведения анализа синтезируют одноцепочечный ДНК- или РНК-зонд, комплементарный специфическим нуклеотидным последовательностям возбудителя. Зонд метят радионуклидом, ферментом или другой легко распознаваемой меткой. Исследуемый материал подвергают обработке с целью лизиса микроорганизмов, находящихся в биопробе, выделения и денатурации ДНК. Далее проводят инкубацию зонда с исследуемым образцом и измерение количества меченой ДНК, вступившей в гибридизацию с ДНК, находящейся в исследуемой пробе. Реакция может происходить как на твердофазных сорбентах, так и в растворе, однако обязательным условием является отмывка несвязавшихся количеств меченого зонда. Чувствительность метода гибридизации нуклеиновых кислот уступает таковой ПЦР и составляет 103 микробных клеток в пробе.

Метод иммуноферментного анализа является современным методом лабораторного исследования крови на присутствие в ней антител к вирусам и антигенов к возбудителям болезни. Этот метод способен не только выявить этиологию, но еще и определить стадию заболевания. Результаты анализа имеют качественный и количественный показатель.

Для чего проводиться иммуноферментный анализ:

· обследования крови(общий анализ крови) на присутствие в ней аутоиммунных болезней;

· обследование больного на онкомаркеры;

· возможность исследовать гормональный состав крови;

· поиск антигенов к инфекционным и венерологическим болезням;

· поиск антител к вирусным инфекциям.

Преимущества иммуноферментного анализа состоят в том, что он гарантирует высокий уровень специфичности результатов и имеет высокую чувствительность (больше 90 %) к возбудителям инфекций. ИФА является доступным методом диагностики, который выполняют в каждом медицинском центре. Также, с помощью такого метода можно определить не только заболевание, но и следить за процессом его развития, сравнивая количество выработанного в крови белка, в разные промежутки время.

Единственным недостатком ИФА, пожалуй, является то, что с его помощью нельзя определить возбудителя инфекции, а можно только выявить иммунный ответ на этот возбудитель.

Основные термины иммуноферментного анализа (ИФА)

Сначала разберемся с некоторыми понятиями, чтобы разобраться в принципе проведения лабораторного исследования.

Иммунный комплекс – это комплекс антител и антигенов, присутствующих в крови, и участвующих в иммунном процессе.

Антигены – это вещества, которые имеют органическое происхождение и образовываются в результате той или иной болезни в клетках организма. Причиной этому может стать аутоиммунное или онкологическое заболевание. Также, антигенами могут быть вещества различных возбудителей инфекционных заболеваний.



Авидность антител — это показатель прочности связи между антигеном и антителом, а также количество антигена, которое вступило в связь с антителами (иммуноглобулинами).
Это очень важный показатель, поскольку с его помощью можно определить дату инфицирования человека, что очень важно при заражении на протяжении срока беременности.
Тест на авидность проводится в лабораторных условиях путем обработки комплекса антитело-антиген мочевиною, что разрушает белок. При этом, соединения с низкой авидностью разрушаются, а соединения, имеющие высокую авидность остаются неповрежденными. Результаты теста на авидность выражаются в процентном соотношении.

Антитела (иммуноглобулины) – это специальный белок, который вырабатывают лимфоциты, то есть иммунные клетки, при попадании в организм человека бактерий, вирусов или грибов (инфекционного патогена).
Существуют иммуноглобулины пяти видов: A, E, M, G, D. Они отличаются друг от друга массой, формой, участием в инфекционном процессе, периодом полураспада, сроками образования с момента заражения.
Самый большой молекулярный вес имеет иммуноглобулин IgM (пентамер), он весит 950000 дальтон, в то время как остальные имеют вес в пределах 150 – 200 000 дальтон. Из-за своих размеров IgM не проходят через плацентарный барьер. В сыворотке из крови основную массу занимают иммуноглобулины IgG, их процентное соотношение занимает приблизительно 80 %. А самую малую часть в сыворотке занимают антитела IgE – 0,003%. В инфекционном процессе участвуют иммуноглобулины IgG, IgМ, IgА. В то время, как IgE являются результатом аллергических реакций. Такие белки как IgD принимают участие в формировании местного иммунитета и образовываются в лимфоузлах и миндалинах.





sdamzavas.net - 2020 год. Все права принадлежат их авторам! В случае нарушение авторского права, обращайтесь по форме обратной связи...